菌落原位雜交是原位雜交技術(shù)的另一種形式。通常應用于確定帶有重組分子的細菌菌落中與探針同源的外源DNA插入片段。細菌菌落首先從培養皿上轉移到硝酸纖維膜上，經(jīng)過(guò)細胞裂解，DNA釋放、變性和固定后與探針雜交。另一相似的技術(shù)是噬菌斑原位雜交，不同的是印跡在硝酸纖維膜上的是噬菌體而不是菌落。這些技術(shù)專(zhuān)門(mén)用來(lái)從基因文庫或cDNA文庫中篩選與探針同源的重組子。

操作

是將細菌從培養平板轉移到硝酸纖維素濾膜上，然后將濾膜上的菌落裂菌以釋出DNA。將DNA烘干固定于膜上與P32標記的探針雜交，放射自顯影檢測菌落雜交信號，并與平板上的菌落對位。

核酸分子雜交

根據異源單鏈核酸分子間因結構互補發(fā)生共價(jià)鍵結合，能形成互補雜合雙鏈，而進(jìn)行分子遺傳學(xué)研究的一種技術(shù)。雙鏈核酸分子加熱至80～100℃時(shí)，堿基對之間的氫鍵斷開(kāi)，形成兩條單鏈，這一過(guò)程叫作核酸的變性作用或解鏈。變性的核酸分子慢慢冷卻，互補的堿基對之間又會(huì )重新形成雙鏈分子，這一過(guò)程叫作核酸的復性作用或退火。核酸分子在pH〉10和pH〈3的環(huán)境中也會(huì )變性，當條件適合時(shí)又可復性。核酸分子雜交技術(shù)是基于核酸變性與復性的原理。

利用核酸雜交技術(shù)進(jìn)行定性或定量分析的最有效方法是將一種核酸單鏈用同位素或熒光物質(zhì)標記，制成探針(見(jiàn)核酸分子探針)，再與另一種核酸單鏈雜交。

雜交方法

核酸分子雜交有液相和固相兩種方法。液相法的核酸單鏈分子都在溶液中，通過(guò)分子運動(dòng)進(jìn)行雜交固相法是將一種核酸單鏈固定在不溶性的介質(zhì)上。另一種核酸單鏈在溶液中與固定的核酸分子進(jìn)行雜交。常用的固相介質(zhì)有硝酸纖維膜、尼龍纖維膜、瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠等。