方法簡(jiǎn)介

免疫組織化學(xué)是應用抗原和抗體結合的原理，檢測細胞內多肽、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)的分布。這種方法的特異性強、敏感度高、發(fā)展迅速、應用廣泛，成為生物學(xué)和醫學(xué)眾多學(xué)科的重要研究手段。

免疫組織化學(xué)又稱(chēng)免疫細胞化學(xué)，是指帶顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過(guò)抗原抗體反應和組織化學(xué)的呈色反應，對相應抗原進(jìn)行定性、定位、定量測定的一項新技術(shù)。它把免疫反應的特異性、組織化學(xué)的可見(jiàn)性巧妙地結合起來(lái)，借助顯微鏡(包括熒光顯微鏡、電子顯微鏡)的顯像和放大作用，在細胞、亞細胞水平檢測各種抗原物質(zhì)(如蛋白質(zhì)、多肽、酶、激素、病原體以及受體等)。

免疫組織化學(xué)的全過(guò)程包括：1.抗原的提取與純化；2.免疫動(dòng)物或細胞融合，制備特異性抗體以及抗體的純化；3.將顯色劑與抗體結合形成標記抗體；4.標本的制備；5.免疫細胞化學(xué)反應以及呈色反應；6.觀(guān)察結果。

方法原理

免疫熒光方法

是最早建立的免疫組織化學(xué)技術(shù)。它利用抗原抗體特異性結合的原理，先將已知抗體標上熒光素，以此作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原，在熒光顯微鏡下觀(guān)察。當抗原抗體復合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會(huì )發(fā)出一定波長(cháng)的熒光，從而可確定組織中某種抗原的定位，進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析。由于免疫熒光技術(shù)特異性強、靈敏度高、快速簡(jiǎn)便，所以在臨床病理診斷、檢驗中應用比較廣。

免疫酶標方法

免疫酶標方法是繼免疫熒光后，于60年代發(fā)展起來(lái)的技術(shù)?；驹硎窍纫悦笜擞浀目贵w與組織或細胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過(guò)光鏡或電鏡，對細胞表面和細胞內的各種抗原成分進(jìn)行定位研究。免疫酶標技術(shù)是目前最常用的技術(shù)。本方法與免疫熒光技術(shù)相比的主要優(yōu)點(diǎn)是：定位準確，對比度好，染色標本可長(cháng)期保存，適合于光、電鏡研究等。免疫酶標方法的發(fā)展非常迅速，已經(jīng)衍生出了多種標記方法，且隨著(zhù)方法的不斷改進(jìn)和創(chuàng )新，其特異性和靈敏度都在不斷提高，使用也越來(lái)越方便。目前在病理診斷中廣為使用的當屬PAP法、ABC法、SP法等。

免疫膠體金技術(shù)

免疫膠體金技術(shù)是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標記物。膠體金是指金的水溶膠，它能迅速而穩定地吸附蛋白，對蛋白的生物學(xué)活性則沒(méi)有明顯的影響。因此，用膠體金標記一抗、二抗或其他能特異性結合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針，就能對組織或細胞內的抗原進(jìn)行定性、定位，甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒，且膠體金的電子密度高，所以免疫膠體金技術(shù)特別適合于免疫電鏡的單標記或多標記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色，因此也適合進(jìn)行光鏡觀(guān)察。如應用銀加強的免疫金銀法則更便于光鏡觀(guān)察。