環(huán)境因素、操作因素、實(shí)驗方法或者患者自身因素等都可能造成假陽(yáng)性檢測結果。以梅毒檢測為例,分析造成假陽(yáng)性的普遍原因:
梅毒的診斷主要靠臨床癥狀和血清檢查,常見(jiàn)的是梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(PA)和梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA),PA已經(jīng)確定為美國疾控中心的標準方法。ELISA因其操作方便,結果較為準確,價(jià)格低廉在國內還受到廣泛的使用。梅毒的診斷主要靠臨床癥狀和血清檢查,無(wú)臨床癥狀和疾病接觸史可出現假陽(yáng)性,其主要原因有以下幾點(diǎn): 1.標本因素
1.1標本處理不完全:血液標本未完全抗凝即開(kāi)始離心,析出的纖維蛋白易在孔板中形成白色薄膜或者絮狀物,若清洗不干凈,殘余在孔板中極易使吸光度值偏高,造成假陽(yáng)性。
1.2標本溶血:血液樣本溶血后細胞內的各種酶和具有酶樣活性的物質(zhì)可與底物非特異性結合,標本溶血時(shí)細胞內液的各種活性酶及具有酶樣活性的物質(zhì)可與底物非特異性結合;溶血后釋放出的血紅蛋白(Hb)具有類(lèi)過(guò)氧化物酶的活性,可少量吸附于孔板上,隨著(zhù)溶血程度增大而增加,在洗板不徹底的情況下從而使樣本OD值升高,造成假陽(yáng)性。 1.3標本被細菌污染:標本采集后及分離血清時(shí)若被細菌污染,也可引起內源性辣根過(guò)氧化物酶增多,相應的酶標記方法會(huì )產(chǎn)生非特異性干擾,造成假陽(yáng)性。
1.4標本保存不當:血液標本保存過(guò)久易滋生細菌,影響檢測結果。時(shí)間過(guò)長(cháng)的標本,血清標本IgG聚集成多聚體,AFP形成二聚體,造成假陽(yáng)性。 2.使用儀器及操作因素
2.1拖帶現象:全自動(dòng)家養系統可以準確、快速加樣,避免手工的誤差也保證了加樣的一致性。但是全自動(dòng)加樣儀還不能完全確保一份樣本一個(gè)加樣頭。加完樣后雖然其可以自動(dòng)清洗3次,而高濃度的抗原或者抗體標本檢測后,拖帶污染可能導致后面或者多孔樣本的假陽(yáng)性。
2.2酶標儀:酶標儀進(jìn)行比色時(shí),當反應板有氣泡或者污 染時(shí),容易出現吸光度值升高,從而造成假陽(yáng)性結果。
2.3試驗溫度:試驗溫度過(guò)高或過(guò)低都有可能引起血清蛋白異常,造成假陽(yáng)性。最好在室溫18~25℃進(jìn)行操作。
2.4操作因素:操作過(guò)程中一些因素也會(huì )導致假陽(yáng)性,檢測底物反復使用出現被污染或者底物受到陽(yáng)光照射時(shí)間過(guò)長(cháng)會(huì )出現假陽(yáng)性;孔板洗滌過(guò)程中出現溢出現象,陽(yáng)性標本的反應液污染臨近孔板造成假陽(yáng)性;洗滌過(guò)程中洗滌時(shí)間太短或次數太少,洗滌不充分導致酶制劑殘留形成假陽(yáng)性。
3.個(gè)人因素
3.1生理機能:ELISA試劑盒主要是通過(guò)抗原抗體檢測梅毒螺旋體,理論上ELISA的位點(diǎn)少,結果更具特異性,但由于人血清抗原中存在假陽(yáng)性位點(diǎn)的問(wèn)題,造成假陽(yáng)性。老年人身體機能退化,易出現免疫功能異常,產(chǎn)生乙烯異常蛋白干擾檢測結果。
3.2疾?。豪夏耆碎L(cháng)伴有各種疾病,如腸癌、肺癌、腹腔內膜癌、子宮內膜癌等腫瘤,肺結核,血液病,自身免疫性疾病,可以導致患者自身免疫環(huán)境的改變,或者糖尿病、腫瘤、肝病、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節炎患者體內含有治療性抗體、糖尿病抗體、類(lèi)風(fēng)濕因子、甲胎蛋白等,使底物出現顯色反應,造成假陽(yáng)性結果。 4.方法學(xué)因素
4.1灰帶區現象
ELISA是一種定性檢測梅毒的方法,在陽(yáng)性與陰性之間有一條分界線(xiàn),即判定值,通常在判定值左右有一定的范圍,為灰帶區。結果位于灰帶區的標本易出現假陽(yáng)性,需要重新檢測確定是否為陽(yáng)性。
4.2空白對照的影響
空白對照組對結果具有很大的影響,比如反應孔出現刮痕,可使測定值升高,不設定對照組也可出現誤讀形成假陽(yáng)性。